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操作步骤：提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化，震荡混匀。
1) 每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer（注意：A buffer需完全融化混匀，否则会对实验效果产生影响）；
2) 每个反应管分别加入2 μL上游引物和2 μL下游引物（引物浓度10 μM，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中）；
3) 向反应管中依次加入12.1 μL ddH2O和2 μL核酸模板（可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为14.1 μL）; 
4) 后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（请务必上下颠倒甩动反应管8-10次进行混匀；对于多个反应，建议将B buffer加至反应管的盖子内侧上下颠倒后混匀）；
5) 混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 ºC孵育30 mins；
6) 反应结束后，加入Tris饱和//（25：24：1）抽提液，1:1混匀抽提反应液，12000 rpm离心5 min，取5 μL上清进行琼脂糖凝胶电泳检测（琼脂糖凝胶浓度建议为1.5%-2%）。（注：高温变性不能有效去除蛋白，可能对产物分析造成影响；市场上部分扩增产物纯化试剂盒不适用，可能造成假阴性结果。）



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